Dirección para correspondencia,
dirigida a:
María J. Ramírez-Vargas
mjramirezv@ccss.sa.cr
Recibido: 10 de noviembre del 2025
Aceptado: 17 de marzo 2026
Publicado: 30 de marzo del 2026
Los artículos publicados en La Revista del Colegio de Microbiólogos y Químicos Clínicos se distribuyen bajo la licencia Creative Commons Atribución–NoComercial–CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0).
El Protocolo para la prevención y control de la leptospirosis fue publicado por el Ministerio de Salud de Costa Rica en el año 2002 (Ministerio de Salud Costa Rica, 2002). En dicho documento se establecía la confirmación de leptospirosis por métodos serológicos mediante la determinación de IgM anti Leptospira en dos muestras cuya diferencia de título fuera igual o mayor a 4 veces; en una muestra aguda y una convaleciente tomada con 2 o 3 semanas de diferencia a partir del día 8 del inicio de síntomas. En el caso de determinarse por la técnica de microaglutinación (MAT), se requiere detectar los anticuerpos antileptospirales en un aumento igual o mayor a un título desde la primera muestra.
Si bien es cierto que la leptospirosis está incluida dentro de la vigilancia de las enfermedades febriles (Ministerio de Salud Costa Rica, 2002), el número de muestras referidas por el clínico para descartar este agente es muy discreto o incluso inexistente en algunos centros de la región. Además, la dificultad de tomar mínimo dos muestras por paciente, en días señalados para confirmar un diagnóstico, repercute en el gran subregistro existente de esta enfermedad en las comunidades locales.
Por otra parte, ya en 2008 la Organización Mundial de la Salud menciona las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) como un método rápido posible de diagnóstico temprano de la leptospirosis (Organización Mundial de la Salud, 2008). Asimismo, se publicaron protocolos de extracción de ADN y se mencionan secuencias de los genes rrs y secuencias blanco combinadas secY y flaB o el gen lipL32 para la detección (Ahmed et al., 2009; Ahmed et al., 2020; Galloway & Hoffmaster, 2015).
El Laboratorio de Enfermedades Febriles Zoonóticas (LEFZ) del Centro Nacional de Referencia de Bacteriología (CNRB) de Inciensa es el encargado de realizar la vigilancia basada en laboratorio de la leptospirosis a nivel nacional. El diagnóstico y la vigilancia se realizan por medio de métodos moleculares y serológicos basados en un algoritmo que considera las características de la muestra y los días de evolución del paciente al momento de la toma de la muestra, con el fin de aplicar varias metodologías de manera concomitante y asegurar una mayor sensibilidad en el diagnóstico. La detección molecular se realiza por medio de PCR en tiempo real basado en la detección del gen lipL32 (Ahmed et al, 2020), mientras que los métodos serológicos consisten en un ensayo ELISA IgM (Serion/Virion, Alemania) y la técnica de microaglutinación (MAT), que es el estándar de oro para el diagnóstico de leptospirosis (OMS, 2008).
A partir del año 2020, como respuesta a la pandemia de COVID-19, la Gerencia de la Caja Costarricense del Seguro Social inicia la creación de una Red de Laboratorios de Diagnóstico Molecular como un esfuerzo institucional para regionalizar dichas tecnologías. Parte de esta iniciativa es la regionalización de las pruebas para la determinación de virología de dengue, zika y chikungunya que a partir de abril del año 2024 se han venido analizando en el Hospital Dr. Fernando Escalante Pradilla (HEP-CCSS) y otros laboratorios de la red.
Dengue y Leptospira comparten sintomatología, presentación clínica y contexto epidemiológico-ambiental. Desde agosto del año 2024, y como iniciativa del Inciensa se pidió la colaboración de referir las muestras con resultados de PCR no detectados por dengue, zika y chikungunya con el fin de mejorar la vigilancia de esta enfermedad en la región. Como resultado de esta vigilancia conjunta, se presentan los resultados encontrados.
Se trata de un análisis tipo retrospectivo, utilizando como población las muestras de suero y plasma referidas al laboratorio clínico del HEP-CCSS de la Región Brunca, durante el primer semestre del año 2025. Las muestras analizadas fueron recolectadas dentro de los días 0-5 desde la fecha de inicio de síntomas para descartar dengue, zika y chikungunya mediante RT-PCR multiplex (Trioplex).
Las muestras con resultados no detectados para dengue, zika y chikungunya fueron referidas al Inciensa con el fin de descartar la presencia de Leptospira mediante pruebas serológicas y moleculares. Las muestras fueron referidas junto con la boleta de Solicitud de Diagnóstico Inciensa-R85, detallando la información de fecha de inicio de síntomas, días de evolución y otros factores de riesgo de exposición. Se utilizó como base de datos la generada por el laboratorio clínico y el expediente único digital en salud (EDUS©) para realizar las consultas correspondientes. Como herramienta para el análisis de los datos se utilizó hoja de cálculo de Microsoft Excel Office© y el software Epi Info©.
Criterios de inclusión: Muestras referidas al laboratorio clínico del Hospital Dr. Fernando Escalante Pradilla de la CCSS en la Región Brunca, para descartar dengue-zika o chickungunya (DZC) por métodos moleculares con 0-5 días desde la fecha de inicio de síntomas (FIS).
Criterios de exclusión:
Extracción de ADN y amplificación por PCR en tiempo real: Las muestras referidas con 1-6 días de evolución desde el inicio de los síntomas fueron analizadas por PCR tiempo real. Para esto se extrajo ADN genómico de 200 μl de suero o plasma utilizando el kit de extracción StarMag 96 y la plataforma automatizada SEEPREP 32 (Seegene, Corea), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADN de Leptospira patógena se amplificó mediante PCR en tiempo real dirigida al gen lipL32 (Ahmed et al., 2020) desarrollado por el Centro de Referencia de Leptospirosis del Amsterdam University Medical Center, el cual es un centro de excelencia de la Organización Mundial de la Salud (OMS) y referente en leptospirosis a nivel mundial. Las reacciones se corrieron en un sistema de PCR en tiempo real 7500 Fast (Applied Biosystems, California, Estados Unidos).
Se aplicaron las siguientes condiciones de amplificación: las reacciones se realizaron en un volumen total de 25 μl, compuesto por 1x TaqMan® Fast Advanced Master Mix (Applied Biosystems, California, Estados Unidos), primer forward (lipL32F, 5'CGCTGAAATGGGAGTTCGTATGATTTCC3'), primer reverse (lipL32R, 5'GGCATTGATTTTTCTTCYGGGGTWGCC3') y una sonda marcada con FAM y BHQ1 (5'FAM-AGGCGAAATCGGKGARCCAGGCGAYGG3'-BHQ1), con una concentración final de 0.4 µM para los primers y 0.2 μM para la sonda. Se añadió agua grado biología molecular a un volumen de 15 µl, y posteriormente se añadieron 10 µl de ADN extraído, para un volumen final de reacción de 25 µl.
El protocolo de amplificación se corrió en modo Fast y consistió en 2 min a 50 °C, seguido de 95 °C por 5 minutos y 45 ciclos de amplificación (95 °C durante 20 segundos y 60 °C durante 30 segundos). Las muestras se analizaron por triplicado. Se consideraron positivas las muestras que presentaron Cts < 42.
ELISA IgM: Las muestras referidas con 1-17 días de evolución desde el inicio de los síntomas fueron analizadas por la presencia de anticuerpos antileptospirales de tipo IgM utilizando el Kit Serion ELISA Classic Leptospira IgM (Virion/Serion, Alemania), según las instrucciones del fabricante.
Prueba de microaglutinación MAT: Todas las muestras referidas se analizaron por la prueba de MAT (Goris y Hartskeerl, 2014), la cual constituye el estándar de oro para el diagnóstico de leptospirosis. Se utilizó un panel de 31 serovares de referencia de Leptospira que comprenden los principales serogrupos patógenos y 5 cepas autóctonas aisladas a partir de muestras PCR positivas.
De enero a junio de 2025 se procesaron un total de 647 muestras para descartar dengue, zika y chikungunya, en las que se detectó dengue en 84 muestras para un 13% del total referido. No se detectó zika ni tampoco chikungunya para el mismo periodo. De las muestras en las que no se detectó DZC, un total de 563, fueron enviadas a Inciensa para realizar el diagnóstico de leptospirosis por métodos moleculares y serológicos.
De las 316 muestras enviadas, se diagnosticó leptospirosis por serología en 115 muestras (36.4%), 149 resultaron negativas y 52 muestras presentaron un resultado indeterminado. La positividad observada durante el presente periodo fue superior al porcentaje de positividad reportado a nivel nacional en el año 2025, que alcanzó un 32.49% (SILAB Web, Laboratorio de Enfermedades Febriles Zoonóticas). Por otra parte, en Cajamarca, Perú se encontró un 31,7% de positividad por leptospirosis mediante la técnica MAT, entre muestras previamente testeadas negativas por dengue en el 2019 (Alvarado Dávila et al., 2019), en un estudio de características similares al presente.
Para clasificar las muestras referidas al laboratorio por hospital de origen y determinar su incidencia relativa, se calculó el porcentaje de detección de dengue y Leptospira.
| Leptospira detectado casos | Origen (%) | Dengue detectado (%) | Dengue detectado casos | |
|---|---|---|---|---|
| HEP | 33 | 28.7 | 35.7 | 30 |
| ASBA | 7 | 6.1 | 1.2 | 1 |
| HCN | 21 | 18.3 | 19 | 16 |
| HMMV | 31 | 27 | 4.8 | 4 |
| HJP | 2 | 1.6 | 2.4 | 2 |
| HTCC | 21 | 18.3 | 29.8 | 25 |
| ASPZ | 0 | 0 | 7.1 | 6 |
| Total | 115 | 100 | 100 | 84 |
| Nota. HEP: Hospital Dr. Fernando Escalante Pradilla; ASBA: Área de Salud de Buenos Aires; HCN: Hospital Ciudad Neilly; HMMV: Hospital Manuel Mora Valverde; HJP: Hospital Juana Pirola; HTCC: Hospital Tomás Casas Casajús; ASPZ: Área de Salud de Pérez Zeledón. Fuente: BD Laboratorio Clínico. Diagnóstico Molecular, HEP (CCSS). 2025. | ||||
El porcentaje de muestras con Leptospira detectado se obtuvo de la siguiente manera:
Muestras Leptospira detectado/total de muestras enviadas a Inciensa * 100
El porcentaje de muestras con dengue detectado se obtuvo de la siguiente manera:
Muestras dengue detectado/total de muestras procesadas en HEP * 100
A nivel global, en la Región Brunca se observa un mayor porcentaje de casos detectados por Leptospira que por dengue. Cuando se clasifican los casos por origen se encuentran centros donde es más frecuente Leptospira, como el Área de Salud de Buenos Aires (ASBA-CCSS) y Hospital Manuel Mora Valverde (HMMV-CCSS). En otros centros es más frecuente dengue, como en el Hospital Escalante Pradilla (HEP-CCSS) y en el Hospital Tomás Casas Casajús (HTCC-CCSS).
Al caracterizar los casos de leptospirosis por edad, se obtuvo una media de 31 ± 20 años, lo cual muestra una amplia distribución etaria entre los casos confirmados. La mayor proporción de casos se concentró en el grupo de 19 a 40 años (47.8%), seguido por los grupos de 41 a 65 años (24.3%) y 0 a 18 años (23.5%), mientras que los mayores de 65 años representan únicamente el 4.4% de los casos. En conjunto, estos resultados evidencian que la mayor carga de la enfermedad se concentra en población en edad productiva.
La mayoría de las muestras (97,4%) se recibieron dentro del periodo adecuado para diagnóstico molecular según la FIS de 1 a 5 días, lo que indica que la determinación de virología de dengue, en general, está bien establecida entre el personal clínico. Esto podría ser una gran oportunidad diagnóstica para otros patógenos que comparten los mismos signos y síntomas, dentro de la misma ventana de tiempo, como es el caso de determinación por PCR de Leptospira.
Cuando se compararon las muestras según el sexo del paciente, no se encontró diferencia significativa entre ambos sexos para el periodo observado. En cuanto al origen de la muestra, es decir, en el centro que realiza la captación del paciente, se encontró una diferencia significativa en el Hospital Manuel Mora Valverde (HMMV-CCSS) en comparación con las diferentes muestras de la Región (p = 0,001). Además, hubo una mayor probabilidad de que la muestra resultara positiva por Leptospira cuando era referida por este centro (RR=1,77).
| Días desde inicio de síntoma | Frecuencia | Porcentaje acumulado (%) |
|---|---|---|
| 0-1 | 22 | 19.1 |
| 2 | 30 | 45.2 |
| 3 | 30 | 71.3 |
| 4 | 18 | 87.0 |
| 5 | 12 | 97.4 |
| >5 | 3 | 100 |
| Fuente: BD Laboratorio Clínico, EDUS. Diagnóstico Molecular, HEP (CCSS). 2025. | ||
| n=115 casos | Incidencia *1000 | Chi2 | p | RR | |
|---|---|---|---|---|---|
| ASBA | 7 | 1.8 | 0.11 | 0.74 | — |
| HEP | 33 | 8.3 | 3.50 | 0.06 | — |
| HCN | 21 | 5.3 | 1.58 | 0.21 | — |
| HMMV | 31 | 7.8 | 10.65 | 0.001 | 1.71 |
| HJP | 2 | 0.5 | 0.62 | 0.43 | — |
| HTCC | 21 | 5.3 | 1.31 | 0.25 | — |
|
Sexo: Masculino 59.9% (69) — Incidencia: 59 900 | Femenino 39.1% (45) — Incidencia: 39 100. Chi2: 0,31 | p: 0,56 Nota. HEP: Hospital Dr. Fernando Escalante Pradilla; ASBA: Área de Salud de Buenos Aires; HCN: Hospital Ciudad Neilly; HMMV: Hospital de Golfito Manuel Mora Valverde; HJP: Hospital Juana Pirola; HTCC: Hospital Tomás Casas Casajús; ASPZ: Área de Salud de Pérez Zeledón. Fuente: BD Laboratorio Clínico. Diagnóstico Molecular, HEP (CCSS). 2025. |
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Probablemente la leptospirosis es una enfermedad febril subdiagnosticada en la región. Se encontró una mayor incidencia de casos de leptospirosis en comparación con dengue, zika o chikungunya en la Región Brunca para el primer semestre de 2025, tanto a nivel regional como en cada uno de los centros de salud analizados.
En la Región Brunca, la mayoría de las muestras con leptospirosis corresponden a pacientes en edad productiva, lo que supone un alto impacto económico para las comunidades locales.
Con el laboratorio de la Red de Diagnóstico Molecular de la Caja Costarricense de Seguro Social, existe una buena plataforma en la región para el diagnóstico temprano de la leptospirosis. Actualmente, el clínico ya se encuentra familiarizado con el envío de muestras aptas para la determinación de patógenos dentro de una fecha de inicio de síntomas igual o menor a 5 días, lo que representa una oportunidad para aprovechar la plataforma instalada en el Hospital Dr. Fernando Escalante Pradilla y valorar la introducción de la PCR para Leptospira dentro del algoritmo diagnóstico local.
Es importante mencionar que, debido a la patogénesis de la enfermedad, en la cual los niveles de leptospiremia disminuyen progresivamente, es indispensable la realización de métodos serológicos de manera concomitante en todas las muestras analizadas por biología molecular. De igual manera, las muestras positivas por PCR deben ser enviadas a Inciensa para su confirmación y aislamiento de Leptospira (Chinchilla et al., 2025).
Con las muestras referidas por el Hospital Manuel Mora Valverde (HMMV-CCSS), donde se ha visto una diferencia significativa, se podría iniciar la validación de la prueba de PCR para Leptospira y su posterior aplicación dentro de la Red de Diagnóstico Molecular.
En cuanto a otras diferencias observadas, se requieren estudios más profundos sobre factores de riesgo y un mayor tamaño muestral para poder establecer mejores conclusiones.